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微柱凝胶法检测血型及配血出现双群结果原因分析

摘自《微柱凝胶法检测血型及配血出现双群结果原因分析》(张川(重庆市第七人民医院检验科),《检验医学与临床》2018年12月第15卷第24期)

640微柱凝胶技术目前已广泛应用于医院临床输血红细胞血清学检测,其中输血前血型/交叉配血试验是最常规的工作之一。微柱凝胶法在血型/交叉配血试验中红细胞凝集反应结果判读上可能出现:++++、+++、++、+、+/-、-、溶血、双群(D.P)共8种结果,在这些判读结果中,D.P双群结果就是微柱凝胶顶部和底部均能看见红细胞,D.P双群结果虽然出现的概率非常小,但D.P双群是困扰实验人员判定血型/交叉配血结果的干扰因素,给最后报告带来非常大的不确定性。本文着重探讨微柱凝胶技术检测ABO-Rh(D)血型/交叉配血判读结果出现D.P双群结果的原因,现报道如下。

1 资料与方法

1.1  一般资料 

15846例血型标本来自本院2013-2015年门诊及住院患者血样;3692例交叉配血受血者标本来自本院临床输血患者血样,所有献血员标本来自重庆市血液中心。

1.2  仪器与试剂 

西班牙Grifols公司Diana专用离心机(DG Spin)、DIANA专用孵育器(DG Therm)。西班牙Grifols公司Diana血型确认卡(Diana confirm)、Diana抗人球蛋白卡(Diana Coombs),红细胞稀释液采用本院制备的生理盐水。

1.3  方法

1.3.1  标本预处理 

血型标本采用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝,3000r/min离心5min备用;交叉配血标本:受者标本(EDTA-K2抗凝)、取献血员血袋辫子血(枸橼酸钠抗凝)3000r/min离心5min 备用。

1.3.2  微柱凝胶法血型试验 

正定ABO-Rh(D)血型,取Diana血型确认卡(Confirm)1张,在抗A-抗B- 抗D-Ctl 4孔各加入1%红细胞悬液50μL,放入DIANA专用离心机900r/min离心9min,按试剂说明书判读结果。

1.3.3  微柱凝胶交叉配血试验 

取Diana抗人球蛋 白卡(Coombs)1张,标注好主侧和次侧,主侧先加入献血员1%红细胞悬液50μL,再加入患者血浆25μL,次侧先加入患者1%红细胞悬液50 μL,再加入患者血浆25μL,凝胶卡置Diana 37℃专用孵育器 孵育15min,孵育好的凝胶卡用Diana专用离心机 990r/min离心9min,按试剂说明书判读结果。

2  结果
2.1  ABO-Rh(D)血型结果双群结果分布 

见表1。在送检的15846例血型正定型ABO-Rh(D)标本中,红细胞凝集反应出现76例双群结果,占送检标本的0.47%,其中携带污染39例(51.32%),凝胶卡破损25例(32.89%),A3亚型5例(6.58%),B3亚型4例 (5.26%),白血病患者2例(2.63%),骨髓移植患者1例(1.32%)。

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2.2  交叉配血结果双群结果分布 

见表2。在送检 的3692例交叉配血标本中,红细胞凝集反应出现33例双群结果,占送检标本的0.89%,其中辫子血抗凝不全19例(57.58%),凝胶卡破损12例(36.36%),红细胞破碎2例(6.06%)。
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3  讨论
  微柱凝胶法目前作为红细胞免疫血清学检测方法普遍应用于临床,其工作原理:结合抗原抗体反应与凝胶分子筛技术,通过调节葡聚糖凝胶水平控制分子筛孔径大小,使分子筛只允许游离红细胞通过,达到分离凝集红细胞和游离红细胞的目的。在微柱凝胶法的结果判读上,D.P双群结果虽然少见,但对凝集反应结果的判定D.P双群结果干扰最大。本文应用微柱凝胶法检测近3年送检标本的ABO-Rh(D)血型和交叉配血,对出现的D.P双群结果进行研究和分析,探讨形成双群结果的原因,取得了比较满意的结论。

ABO-Rh(D)血型检测结果76例双群结果中3例携带污染,换实验人员复查结果正常,经循证分析原因是抗D携带污染CTL(自身对照)孔,主要是加样枪尖、凝胶卡覆膜携带污染造成;25例凝胶卡破损, 换新批号的凝胶卡离心后复查结果正常,经观察比较凝胶卡内缓冲液挥发、有气泡、断胶,造成破损的主要原因是凝胶卡运输不妥和保存不当;5例A3亚型,经复查D.P双群依然明显,进一步使用进口抗-A1单克隆血清试管法确认A3亚型,原因是A3亚型红细胞A3抗原与抗-A抗体发生弱的凝集造成;4例B3亚型,复查血型D.P双群依然明显,循证对照后进一步 试验确认B3亚型,原因是B3亚型红细胞B3抗原与抗B发生弱凝集反应造成;2例白血病,患者都是A型血M4型白血病,复查血型结果D.P双群结果明显,原因是M4型A型白血病患者在疾病活动期红细胞表面抗原减弱,可能呈A2或A3型,其中A3抗原会与抗A形成弱凝集反应;1例骨髓移植患者,复查血型结果D.P双群结果明显,经过循证分析原因是异基因骨髓移植,患者红细胞生成期红细胞血型系统表态呈嵌合状态,从而造成D.P双群模式出现。

交叉配血检测结果33例双群模式结果中19例辫子血抗凝不全,辫子血重新离心后复查结果正常,原因是血浆中纤维蛋白在离心时析出,阻隔少量红细胞下降,出现假阳性,即次侧“红线”现象;12例凝胶卡破损,换新批号凝胶卡充分离心复查D.P双群不再出现,原因是凝胶卡保存不妥、运输不当造成缓冲液挥发、气泡、断胶;2例红细胞破损,D.P双群出现在次侧,经观察比较患者红细胞有轻微溶血,洗涤患者红细胞上清液镜下观察有破碎的红细胞碎片,洗涤患者红细胞后复查D.P双群不再出现。

通过本文的探讨与分析,出现D.P双群模式的主要原因是携带污染抗凝不全凝胶卡破损等外在因素造成,为减少D.P双群模式出现,需要实验人员规范标准操作,加强样品预处理、妥善保存和运输凝胶卡。红细胞本身抗原变化引起的D.P双群模式出现概率很小,更需要谨慎细致地进行综合分析加以循证。有关弥散性血管内凝血临床治疗药物引起ABO-Rh(D)血型结果D.P双群、红细胞染菌引起的 交叉配血D.P双群本研究未曾触及,希望能在今后的临床工作中进一步分析和探讨。

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