摘自《微柱凝胶法检测血型及配血出现双群结果原因分析》（张川（重庆市第七人民医院检验科),《检验医学与临床》2018年12月第15卷第24期）
微柱凝胶技术目前已广泛应用于医院临床输血红细胞血清学检测，其中输血前血型/交叉配血试验是最常规的工作之一。微柱凝胶法在血型/交叉配血试验中红细胞凝集反应结果判读上可能出现：++++、+++、++、+、+/-、-、溶血、双群（D.P）共8种结果，在这些判读结果中，D.P双群结果就是微柱凝胶顶部和底部均能看见红细胞，D.P双群结果虽然出现的概率非常小，但D.P双群是困扰实验人员判定血型/交叉配血结果的干扰因素，给最后报告带来非常大的不确定性。本文着重探讨微柱凝胶技术检测ABO-Rh(D)血型/交叉配血判读结果出现D.P双群结果的原因，现报道如下。
1.1 一般资料
15846例血型标本来自本院2013-2015年门诊及住院患者血样；3692例交叉配血受血者标本来自本院临床输血患者血样，所有献血员标本来自重庆市血液中心。
1.2 仪器与试剂
西班牙Grifols公司Diana专用离心机（DG Spin）、DIANA专用孵育器（DG Therm）。西班牙Grifols公司Diana血型确认卡（Diana confirm）、Diana抗人球蛋白卡（Diana Coombs），红细胞稀释液采用本院制备的生理盐水。
1.3.1 标本预处理
血型标本采用乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝，3000r/min离心5min备用；交叉配血标本：受者标本（EDTA-K2抗凝）、取献血员血袋辫子血（枸橼酸钠抗凝）3000r/min离心5min 备用。
1.3.2 微柱凝胶法血型试验
正定ABO-Rh(D)血型，取Diana血型确认卡（Confirm）1张，在抗A-抗B- 抗D－Ctl 4孔各加入1%红细胞悬液50μＬ，放入DIANA专用离心机900r/min离心9min，按试剂说明书判读结果。
取Diana抗人球蛋 白卡（Coombs）1张，标注好主侧和次侧，主侧先加入献血员1%红细胞悬液50μＬ，再加入患者血浆25μＬ，次侧先加入患者1%红细胞悬液50 μＬ，再加入患者血浆25μＬ，凝胶卡置Diana 37℃专用孵育器 孵育15min，孵育好的凝胶卡用Diana专用离心机 990r/min离心9min，按试剂说明书判读结果。
见表１。在送检的15846例血型正定型ABO-Rh(D)标本中，红细胞凝集反应出现76例双群结果，占送检标本的0.47%，其中携带污染39例（51.32%），凝胶卡破损25例（32.89%），A3亚型5例（6.58%），B3亚型4例 （5.26%），白血病患者2例（2.63%），骨髓移植患者1例（1.32%）。
2.2 交叉配血结果双群结果分布
ABO-Rh(D)血型检测结果76例双群结果中3例携带污染，换实验人员复查结果正常，经循证分析原因是抗Ｄ携带污染CTL（自身对照）孔，主要是加样枪尖、凝胶卡覆膜携带污染造成；25例凝胶卡破损， 换新批号的凝胶卡离心后复查结果正常，经观察比较凝胶卡内缓冲液挥发、有气泡、断胶，造成破损的主要原因是凝胶卡运输不妥和保存不当；5例A3亚型，经复查D.P双群依然明显，进一步使用进口抗-A1单克隆血清试管法确认A3亚型，原因是A3亚型红细胞A3抗原与抗-A抗体发生弱的凝集造成；4例B3亚型，复查血型D.P双群依然明显，循证对照后进一步 试验确认B3亚型，原因是B3亚型红细胞B3抗原与抗B发生弱凝集反应造成；2例白血病，患者都是A型血M4型白血病，复查血型结果D.P双群结果明显，原因是M4型A型白血病患者在疾病活动期红细胞表面抗原减弱，可能呈A2或A3型，其中A3抗原会与抗A形成弱凝集反应；1例骨髓移植患者，复查血型结果D.P双群结果明显，经过循证分析原因是异基因骨髓移植，患者红细胞生成期红细胞血型系统表态呈嵌合状态，从而造成D.P双群模式出现。
交叉配血检测结果33例双群模式结果中19例辫子血抗凝不全，辫子血重新离心后复查结果正常，原因是血浆中纤维蛋白在离心时析出，阻隔少量红细胞下降，出现假阳性，即次侧“红线”现象；12例凝胶卡破损，换新批号凝胶卡充分离心复查D.P双群不再出现，原因是凝胶卡保存不妥、运输不当造成缓冲液挥发、气泡、断胶；2例红细胞破损，D.P双群出现在次侧，经观察比较患者红细胞有轻微溶血，洗涤患者红细胞上清液镜下观察有破碎的红细胞碎片，洗涤患者红细胞后复查D.P双群不再出现。
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